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葡聚糖凝膠的洗脫溶劑如何選擇和使用呢?
發布時間:2022-04-15 點擊次數:25次
  葡聚糖凝膠通過羥丙基化制備,并且專門適合用于有機溶劑分離嗜脂性分子,天然產物在有機溶劑中的純化,例如類固醇,萜類化合物,脂質和低分子量肽。
  葡聚糖凝膠 LH-20 洗脫溶劑:
  葡聚糖凝膠 LH-20 洗脫溶劑分為兩類:反相和正相兩種。用得最多的是反相溶劑洗脫,以甲醇——水系統最為常見,先用水,逐漸增加甲醇比例,最后用 100%甲醇沖柱。正相系統以氯仿——甲醇最為常見,先用 50%氯仿——甲醇,逐漸增加甲醇比例,最后用 100%甲醇沖柱。
  樣品的處理和洗脫溶劑的選擇:
  如果樣品極性大,選用反相溶劑洗脫(甲醇——水),樣品用最少體積的甲醇——水(盡可能甲醇少一些)溶解,過濾后,濕法上樣(必須要進行過濾!否則把葡聚糖凝膠 LH-20 堵塞,就必須將葡聚糖凝膠 LH-20 的柱頭部分棄去, 造成不必要的浪費) 。如果樣品極性小, 這選用正相溶劑洗脫 (氯仿——甲醇) ,樣品用最少體積的氯仿——甲醇溶解,過濾后,濕法上樣。
  葡聚糖凝膠 LH-20 的使用方法:
  將干粉浸泡于 60-70%乙醇中(充分攪拌),洗去可能存在的殘留物,抽干然后濕態不間隙裝柱,絕對不能出現凝膠斷層(否則要重新裝柱),動態用一倍柱體積的 60-70%乙醇淋洗,再用水洗凈乙醇即根據自己選用洗脫液平衡層析柱至少兩個柱體積直到基線變得平穩為止,如改變溶劑應該注意凝膠在新溶劑中的溶脹性質,并根據性質確定柱高。如使用相同的溶劑,在以后的層析中柱平衡可以省略。

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