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赭曲霉毒素(OTA)ELISA檢測試劑盒使用說明書

提 供 商: 上海研謹生物科技有限公司 資料大?。?/td>
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詳細介紹

本試劑盒只能用于科學研究,不得用于醫學診斷

赭曲霉毒素OTAELISA檢測試劑盒

使用說明書

檢測原理

試劑盒采用競爭法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包赭曲霉毒素的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的競爭抗原,經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的赭曲霉毒素(OTA)相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1.酶標儀(450nm)

2.高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒溫箱

操作注意事項

1.   試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正?,F象,水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。

2.   實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

3.   按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍,最終結果乘以5才是樣本實際濃度。

4.   嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

5.   所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標板

12孔×8條

12孔×4條

標準品

0.3mL*6管

0.3mL*6管

樣本稀釋液

6mL

3mL

競爭抗原-HRP

6mL

3mL

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說明書進行稀釋

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2張

2張

說明書

1份

1份

自封袋

1個

1個

注:標準品(S0-S5)濃度依次為:0、0.5、1、2、4、8 PPb

試劑的準備

 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

1.   手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。

2.   自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

3.  樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。

4.  除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的競爭抗原50μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

結果判斷

1.  15分鐘內在波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值;

2.  百分結合率計算:設S0管計數為B0,各標準管或樣品管計數為B,非特異管計數為NSB,則百分結合率計算公式如下:B/B0=(B-NSB)/(B0-NSB)×100%

3.  logit計算:各標準點或樣品管的logit值計算公式如下:logit=ln(B/B0)/(1-B/B0)

4.  將標準品的OD均值與標準品0點的OD均相除,為標準點的百分結合率,在log-logit坐標紙上繪圖。

5.  Log-logit雙對數標準曲線:坐標紙上橫軸從左至右第一個1-9表示為第一個10進位,第二個1-9表示為第二個10進位。第三個1-9表示為第三個10進位。坐標紙縱軸為百分比(1-99),即各標準吸光值的百分結合率。取一條通過各點的直線。要求盡可能多的點在線上,同時剩余的點均勻分布在直線的兩邊。樣品也同樣由吸光值計算百分結合率,再從縱軸上的相應結合率找到直線上的點,此點對應的橫坐標濃度即為樣品的濃度,無須換算。

6.  人工處理:以標準濃度取log值為橫坐標,對應的logit值為縱坐標在普通坐標紙上或以標準濃度為橫坐標,對應的B/B0為縱坐標在logit-log坐標紙上畫出標準曲線(理想化時是一條直線)。根據待測樣

品的B/B0可以從坐標紙上查出樣品的濃度值。如果使用普通坐標紙,查出的數值應取反對數才是最后的濃度值。

7.  自動處理:使用logit-log或四參數數據處理模式,由電腦自動計算得出結果。

8.  敏感度:1.0 PPb

9.  圖例

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試劑盒性能

1.  準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值,大于等于0.9900。

2.  靈敏度:最DI檢測濃度小于0.1 PPb。

3.  特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

4.  重復性:板內、板間變異系數均小于15%。

5.  貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

6.  有效期:6個月

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